据媒体报道,近日,【cck8实验原理】引发关注。CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一种广泛应用于细胞活力检测的试剂,其原理基于一种水溶性四唑盐(WST-8)在细胞线粒体脱氢酶的作用下被还原为橙黄色的Formazan产物。这一反应与细胞的代谢活性密切相关,因此可以通过测定吸光度来反映细胞的存活率和增殖能力。
CCK-8实验具有操作简便、灵敏度高、重复性好等优点,常用于药物筛选、细胞毒性研究、细胞增殖分析等领域。
CCK-8实验原理总结
项目 | 内容 |
实验目的 | 检测细胞活力、评估细胞增殖或毒性 |
实验原理 | WST-8在细胞线粒体脱氢酶作用下被还原为可溶性甲臜(Formazan),其生成量与活细胞数量成正比 |
关键物质 | WST-8(四唑盐)、NADH(还原型辅酶I) |
检测方法 | 酶标仪测定450 nm波长处的吸光度(OD值) |
影响因素 | 细胞数量、培养时间、试剂浓度、温育时间等 |
优点 | 灵敏度高、操作简单、无需裂解细胞、适用于多种细胞类型 |
缺点 | 对于某些特殊细胞可能不适用;需避免强光照射 |
实验步骤简要说明
1. 细胞接种:将不同密度的细胞接种到96孔板中,培养一定时间。
2. 加入CCK-8试剂:根据说明书比例加入CCK-8试剂,混匀后继续培养一定时间。
3. 检测吸光度:使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔的吸光度。
4. 数据分析:通过比较不同组的OD值,计算细胞存活率或增殖率。
CCK-8实验因其便捷性和准确性,已成为细胞生物学研究中的常用工具。正确理解其实验原理并规范操作,是保证实验结果可靠性的关键。